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    捕獲包被法檢測抗體和捕獲包被法檢測抗體

    發(fā)布時間: 2019-08-02  點擊次數(shù): 2095次

    捕獲包被法檢測抗體
       
    捕獲包被法(亦稱反向間接法)ELISA,首要用于血清中某種抗體亞型成分(如IgM)的測定。以目前常用的IgM測定為例,因血清中針對某種抗原的特異性IgM和IgG同時存在,則后者可攪擾IgM的測定。因此先將一切血清IgM(包括異性IgM和非特異性IgM)固定在固相上,在去除IgG后再測定特異性IgM。IgM抗體的檢測用于流行癥的前期確診中。先用抗人IgM抗體包被固相,以捕獲血清標(biāo)本中的IgM(其間包括針對抗原的特異性IgM抗體和非特異性的IgM)。然后參加抗原,此抗原僅與特異性IgM相結(jié)合。繼而加酶符號針對抗原的特異性抗體。再與底物作用,呈色即與標(biāo)本中的IgM成正相關(guān)。此法常用于病毒性感染的前期確診。類風(fēng)濕因子(RF)相同能攪擾捕獲包被法測定IgM抗體,導(dǎo)致假陽性反響。因此中和IgG的間接法近來頗受喜愛,用這類試劑檢測抗CMV IgGM和抗弓形蟲IgM抗體已獲成功。
        

    捕獲法測抗體的扼要操作過程:
        
    1)特異性捕獲抗體的包被,先把能特異性結(jié)合待測抗原的抗體固定于固相載體外表;
        
    2)參加待測樣品,通過固定在載體外表的針對該抗原的抗體固定于載體外表;
        
    3)參加特異性抗原以及針對該特異性抗原的酶標(biāo)抗體;
        
    4)參加酶促反響底物,發(fā)作顯色反響,顯色的深淺與待測抗體的量成正比。
        

    捕獲包被法檢測抗體
        
    近年在親和素-生物素體系上又發(fā)展出ABS-ELISA法 。親和素是一種糖蛋白,每個分子由4個能和生物素結(jié)合的亞基組成,生物素為小分子化合物。用化學(xué)辦法制成的衍生物素-羥基琥珀酰亞胺酯可與抗體或酶構(gòu)成生物素符號產(chǎn)品,符號辦法頗為簡潔,并且不影響抗體或酶原有的生物學(xué)活性。親和素生物素體系,簡稱ABS(avidin-biotin system)。因為親和素與生物素間的親和力*,結(jié)合迅速,且安穩(wěn),使BAS符號技能比慣例酶聯(lián)免疫、放射免疫及熒光免疫技能有著更高的靈敏度,為微量抗原、抗體的檢測拓荒了新的途徑,大大提高了檢測的靈敏度,但該辦法比一般ELISA多用了兩種試劑,增加了操作過程,因此在臨床查驗中ABS-ELISA使用不多。ABS-ELISA法可分為酶符號親和素-生物素(LAB)法和橋聯(lián)親和素-生物素(ABC)法兩種類型。兩者均以生物素符號的抗體(或抗原)代替原ELISA體系中的酶標(biāo)抗體(抗原)。
        

    在LAB法中,將特異性抗體生物素化、酶分子符號在親和素分子上,生物素化抗體與被檢抗原結(jié)合后,再借BAS的高度親和力將酶分子聯(lián)結(jié)到抗原分子上,經(jīng)酶促反響即可檢出抗原,因此提高檢測的敏感度。
        

    ABC法相同將特異性抗體生物素化、酶分子標(biāo)在生物素上,親和素和酶標(biāo)生物素需要先按必定比例構(gòu)成ABC復(fù)合物,這種網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)結(jié)合了很多的酶分子,當(dāng)親和素尚未被酶標(biāo)生物素飽滿時,生物素化抗體即可與之結(jié)合, 使被檢抗原、生物素化抗體和酶標(biāo)生物素聯(lián)成一體。

     

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