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研域干貨：常見ELISA試劑盒試驗技能要點
發(fā)布時間： 2019-10-24 點擊次數(shù)： 1253次1. 準(zhǔn)備好所有試驗額定所需物品，如試管、吸頭、移液器、離心機(jī)等；
2. 依據(jù)檢測標(biāo)本數(shù)量確認(rèn)所需試劑的量；
3. 按闡明書將所用試劑平衡至室溫，制造所需試劑；
4. 標(biāo)本制備要規(guī)范，每份標(biāo)本體積要按2-3個復(fù)孔以上的量制備，盡量分裝做備份。短期內(nèi)無法試驗者，留意低溫保存。
試驗中為了確認(rèn)信號和背景應(yīng)將捕獲抗體（0.5-4μg/ml）和檢測抗體（0.25-2μg/ml）在預(yù)試驗中進(jìn)行彼此相抗的滴定。同時，應(yīng)包括在適當(dāng)范圍內(nèi)的規(guī)范品的系列稀釋。按試劑闡明書慣例供給的范圍進(jìn)行操作。
規(guī)范品的制造：對于每種細(xì)胞因子應(yīng)仔細(xì)閱讀闡明書，留意每批的細(xì)節(jié)。在運(yùn)用細(xì)胞因子前，瞬時離心試劑瓶，盡可能多地回收其間的細(xì)胞因子。依據(jù)每批闡明書中的細(xì)節(jié)，將凍干的細(xì)胞因子復(fù)溶。
為了優(yōu)化靈敏度，主張過夜孵育規(guī)范品和標(biāo)本。若運(yùn)用過氧化物酶作為顯色體系，應(yīng)禁止在洗液和稀釋液中加疊氮鈉，疊氮鈉可抑制過氧化物酶的活性。當(dāng)測定混合液體中的抗原時，如血清，主張在標(biāo)本稀釋液中加不相干的Ig。