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    六步兩留意:關(guān)于試驗(yàn)制得細(xì)胞的樣本

    發(fā)布時(shí)間: 2020-02-10  點(diǎn)擊次數(shù): 1488次

    我們?cè)谧鲆豁?xiàng)試驗(yàn)的時(shí)候,需要了解的過(guò)程與所需物品是*的。而今天,我司在這里要給朋友們共享的便是試驗(yàn)制得細(xì)胞的樣本,您需做好下文中的這六步兩留意。所謂的六步兩留意也便是操作的六個(gè)過(guò)程,和兩條留意事項(xiàng),下面我們就來(lái)具體的看看吧。
    試驗(yàn)之前,我公司的技術(shù)人員為朋友們特別準(zhǔn)備說(shuō)明晰所需的物品有哪些:
    1、培養(yǎng)基;不含酚紅的DMEM培養(yǎng)基
    2、處理玻片:將多聚賴(lài)氨酸溶液(溶于1mol/L pH7.0 Tris-HCl緩沖液中),涂布于玻片上,枯燥后即可使用。或許APES 2ml溶于100ml丙酮中,將玻片浸泡入內(nèi),取出晾干,180℃枯燥備用。
    3、洗刷液;0.1M,pH7.2~7.4PBS
    4、細(xì)胞固定液:4%多聚甲醛0.1MPBS(pH7.2~7.4)含有1/1000 DEPC。
    5、乙醇:70%  90%  100%
    6、胃蛋白酶溶液:用0.1N HCl將其稀釋為100μg/ml
    7、設(shè)備:烤箱,CO2培養(yǎng)箱,倒置顯微鏡,玻璃載玻片,原位雜交蓋玻片,溫箱,加樣器和吸頭等。
    操作過(guò)程:
    1、在37℃ 5% CO2條件下將細(xì)胞加在處理的載玻片上,用培養(yǎng)基培養(yǎng),時(shí)間經(jīng)過(guò)預(yù)試驗(yàn)確定;
    2、細(xì)胞長(zhǎng)好后,用洗刷液洗2分鐘×3次,室溫下將其放入細(xì)胞固定液中固定30-60min,蒸餾水洗刷;
    3、室溫下用洗刷液充分洗刷固定細(xì)胞,(枯燥后-20℃冰凍保存2周以上)
    4、雜交前將固定的細(xì)胞進(jìn)行如下處理;順次在70%,90%,100%的乙醇中浸泡,脫水每次5min,用二甲苯洗刷,除掉殘留脂質(zhì)順次在100%,90%,70%乙醇中浸泡,進(jìn)行再水化,每次5min,zui后浸泡于洗刷液中;
    5、在37℃用胃蛋白酶溶液10min處理固定的細(xì)胞,以添加細(xì)胞對(duì)大分子試劑的通透性,再用洗刷液洗5min;
    6、用1%甲醛固定10min,用洗刷液洗凈。
    留意!
    1、所有溶液都必須用RNA酶按捺劑處理。
    2、操作中重要的是及時(shí)固定,并在固定液中加入0.1%的DEPC處理,以按捺RNA酶對(duì)mRNA的分解效果。此外,過(guò)度固定對(duì)原位雜交有顯著的不利影響。

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