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    常溫細(xì)胞處理方式

    發(fā)布時(shí)間: 2023-06-06  點(diǎn)擊次數(shù): 1266次

    細(xì)胞(Cells)是由英國科學(xué)家羅伯特·胡克(Robert Hooke,1635~1703)于1665年發(fā)現(xiàn)的。當(dāng)時(shí)他用自制的光學(xué)顯微鏡觀察軟木塞的薄切片,放大后發(fā)現(xiàn)一格一格的小空間, [1] 就以英文的cell命名之,而這個(gè)英文單字的意義本身就有小房間一格一格的用法,所以并非另創(chuàng)的字匯。

    當(dāng)收到了常溫的細(xì)胞,正確的處理方式應(yīng)該是怎樣的。

    一、首先,觀察細(xì)胞培養(yǎng)瓶是否完好,培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。

        二、用75%酒精擦拭細(xì)胞培養(yǎng)瓶表面,顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題,部分貼壁細(xì)胞會(huì)有少量叢瓶壁脫落;先不要打開培養(yǎng)瓶蓋,將細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)趨置培養(yǎng)2-4小時(shí),以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。

        三、仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書,了解細(xì)胞相關(guān)信息,如貼壁特性(貼壁/懸浮)、細(xì)胞形態(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子、傳代比例、換液頻率等。

        四、靜置完成后,取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶,鏡檢、拍照,記錄細(xì)胞狀態(tài);建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后,定期拍照、記錄細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)。

        五、貼壁細(xì)胞:若細(xì)胞生長(zhǎng)密度超過80%,可正常傳代;若未超過80%,移除細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)基,預(yù)留5m左右繼續(xù)培養(yǎng),直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右再進(jìn)行傳代操作,瓶蓋可稍微擰松。

    六、懸浮細(xì)胞:將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管內(nèi),1200rpm離 心5min,離心后上清培養(yǎng)基可收集備用,管底細(xì)胞沉淀加入5m培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時(shí),若細(xì)胞密度超過80%,可將細(xì)胞懸液分至2個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)培養(yǎng),補(bǔ)加培養(yǎng)基至5ml;若細(xì)胞密度未超過80%,將細(xì)胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng),直至細(xì)胞密,度達(dá)80%左右時(shí)再進(jìn)行傳代操作。

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