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    重點介紹ELISA試劑盒樣本處理及要求

    發布時間: 2013-08-16  點擊次數: 818次

         ELISA試劑盒產品的優劣主要是從其特異性,準確性,度等幾個方面進行判斷.由于篇幅關系,現對產品特異性進行詳細講解:
    特異性指的是在PCR擴增過程中,專一性地擴增目的片段而非其他片段的性能。在PCR實驗本身的靈敏度很高,且實驗條件未充分優化的情況,通常會在目的片段出現的同時伴隨有其他的雜帶,即發生非特異性擴增的現象。模板、引物性 質及質量、反應條件的控制等均會影響PCR擴增的特異性。近年來的研究結果表明,緩沖液的品質(如離子種類與組成,反應優化劑等)對保證PCR的特異性擴 增起著不可忽視的作用。一般的緩沖液中調節氫鍵作用的鹽只有KCl,而東盛HSTM TaqMix的緩沖體系通過反應優化劑以及KCl/(NH4)S
    O4鹽離子體系的平衡調節,顯著提高了PCR擴增的特異性,降低背景。
    PCR實驗的靈敏度與特異性是一對此長彼消的特性,這也決定我們實驗體系調節實際就是找到適合實驗的靈敏度與特異性的平衡點。由于PCR體系中的眾多成分,使得組合較多,篩選工作繁雜。東盛基于靈敏度與特異性分別設計了PCR Mix和HS Taq Mix,幫您確定大的平衡點,如果您需要更細致的平衡點,請選擇相應的Mix Kit系列進行微調。
    ELISA試劑盒 操作實驗中的樣本處理及要求:
    1. 血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如出現沉淀,應再次離心。
    2. 血漿:應根據標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應該再次離心。
    3. 尿液:用無菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。
    4. 細胞培養上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。檢測細胞內的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融,以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
    5. 組織標本:切割標本后,稱取重量。加進一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加進一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。
    6. 標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融.
    7. ELISA試劑盒不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

     

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